KPXY204農(nóng)殘速測試劑原理

    在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導代謝產(chǎn)物 ( 乙酰膽堿 ) 水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應，產(chǎn)生黃色物質，用分光光度計測定 412nm 下的吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。

2 、KPXY204農(nóng)殘速測試劑試劑配制及保存

特別提示：本試劑盒可適用于不同廠家的各種型號農(nóng)殘檢測儀及分光分度計，儀器操作根據(jù)其配套說明書方法，農(nóng)殘檢測方法根據(jù)本試劑盒提供方法操作。

緩沖液： 取 1 包緩沖劑加入 500mL 純凈水中，攪拌溶解制成磷酸緩沖液 (pH 8.0) , 常溫保存。
顯色劑： 取 1 瓶顯色劑加 25mL 磷酸緩沖液溶解，使用時取 100 μ L 避光、 4 ℃保存。
底 物： 取 1 瓶底物加 12.5mL 蒸餾水溶解，使用時取 100 μ L ， 4 ℃冰箱保存；
或 取 1 瓶底物加 2.5mL 蒸餾水溶解 ，使用時取 20 μ L ， 4 ℃冰箱保存；
膽堿酯酶 ： 酶制劑無需配制，可直接取用， 4 ℃保存。

3 、樣品提取

    取 2g 果蔬樣品(塊莖類取 4g )剪成 1cm 左右見方碎片，放入小燒杯(或取樣瓶)中；加入 10mL 緩沖液，振蕩 1min～2min ，倒出提取液，靜置 2min 待測；

4 、測試

對照測試： 于反應瓶中加入 2.5mL 緩沖液， 再分別加入 100 μ L 顯色劑和酶液，混勻，靜置預反應 10min 后加入 100 μ L(或20μL)底物，搖勻并立即倒入比色杯中，放入測試通道， 按儀器“對照”鍵測試 1min的吸光度變值 ΔΑ 0 .

樣品測試： 于反應瓶中加入 2.5 mL 待測液， 其他操作與對照測試相同，測試 1 min的吸光度變化值 ΔΑ t .

結果判定： 以分光光度計測試 (412 nm 波長 ) 時，按以下公式計算出抑制率 : 抑制率 (%)=[( ΔΑ 0 －ΔΑ t )/ ΔΑ 0 ]×100 ；以農(nóng)殘檢測儀檢測時其抑制率一般可自動計算。若樣品抑制率≥50%，表示被測果蔬農(nóng)殘超標，為陽性結果。陽性結果的樣品需做 2 次以上重復檢測，多次檢測仍呈陽性需用氣相色譜等儀器做進一步確認。

小提示 1 ： 本試劑盒可在常溫條件下進行檢測，并可以滿足 GB/T 5009.199-2003 方法的要求。采用國標方法時，預反應時間為 15 min ，條件為 3 7℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱；測試反應時間為3 min. 其余與上述方法相同。

小提示 2 ： 檢測時對照與樣品可同時檢測，而無需將兩者分開兩次檢測，每批檢測的時間應控制*，否則不具有可比性。

小提示 3 ： 底物的使用量根據(jù)配制時的體積決定，若稀釋成 12.5mL/瓶，則使用時加入100μL；若稀釋成2.5mL/瓶，則使用時加入20μL；國標方法中底物的使用量100μL.

小提示 4 ： 在加底物的環(huán)節(jié)中，可預先將底物加入比色杯，待靜置時間一到，馬上將反應瓶中的反應液倒入已經(jīng)加有底物的比色杯，并迅速放入測試通道進行測試。這樣可以減少同時檢測多個樣品時因加底物時間過長而造成的誤差。

5 、注意事項：

    保存：試劑盒包含緩沖劑 10 包，膽堿酯酶 10 瓶，顯色劑 2 瓶，底物 4 瓶，可供 500 份樣品測試；使用前整盒試劑應保存 4 ℃冰箱，保質期 12 個月；室溫或常溫保存時，保質期 3~6 個月。 
    使用：任何試劑使用時，用一瓶打開一瓶，用完后才使用新的，防止變質。 
    器具原則：任何用于移液的器具和容器都應各自貼上標簽，單獨使用，以免交叉污染。
    試劑只出不入原則：測試時，從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。

6 、的特點

( 1 )良好的穩(wěn)定性：在 4 ℃條件下可以保存至少一年，常溫條件下保質期可長達 3 個月；
( 2 )專業(yè)化的制備技術：酶試劑調配成直接取用的液體狀態(tài)，為用戶減少稀釋酶液的麻煩及不確定因素；
( 3 )打破傳統(tǒng)方法所需的苛刻條件的限制：酶試劑可在常溫下直接使用(而無需 37 ℃條件)，使操作更加簡便快捷，并大大降低檢測設備的成本；
( 4 )檢測結果靈敏：zui低檢測限可達 0.1mg/kg 以下，對甲胺磷及樂斯本等常見農(nóng)藥的檢測限均低于 0.8mg/kg ，優(yōu)于相關國家國準要求；
( 5 )抗干擾性強：對芹菜、辣椒、韭菜等辛辣樣品同樣可檢測，不易受其植物次生物質的干擾；
( 6 )通用性：可以適用于同功能的幾乎所有型號的檢測儀器；
( 7 )樣品處理及檢測過程總時間不超過 15 min ，大量檢測時每均每個樣品檢測時間低于 5 min, 大大加快了檢測速度，節(jié)省檢測時間。 
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